Ramos colaterais do arco aórtico e suas principais ramificações no cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) / Collateral branches of the aortic arch and its main rami in crab-eating fox (Cerdocyon thous)

O cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) pertence à família Canidae, encontra-se amplamente distribuído pela América do Sul. Devido à escassez literária a respeito da morfologia desta espécie objetivamos colaborar com o conhecimento da anatomia do arco aórtico e seus ramos colaterais. Foram estudados quatro animais, sendo 2 machos e 2 fêmeas oriundos da Mina de Bauxita, Paragominas, Pará, Brasil/Terra Ltda, sob autorização da SEMA-PA nº 455/2009, que morreram por causas naturais. O sistema arterial foi preenchido com látex corado em vermelho e fixado em solução aquosa de formoldeído 10%. O arco aórtico de Cerdocyon thous apresentou em sua origem apenas dois vasos, o tronco braquiocefálico e a artéria subclávia esquerda. Do tronco braquiocefálico originou-se o tronco bicarotídeo, que se bifurcou nas artérias carótidas comum direita e esquerda, e artéria subclávia direita. Das artérias subclávias ocorreu a formação do tronco costocervical, artéria vertebral, artéria torácica interna, artéria cervical superficial e ao atingir o espaço axilar passa a ser chamada de artéria axilar em ambos os antímeros. Concluímos que o arco aórtico de Cerdocyon thous é similar ao de outros animais domésticos com relação ao número de ramificações em sua origem.(AU)

Crab-eating fox (Cerdocyon thous) belongs to the Canidae family distributed in South America. Due to literary scarcity regarding the morphology of this species, we objectifiked to collaborate with description of the anatomy of the aortic arch and its collateral branches. We studied four foxes, 2 males and 2 females, from Mina Bauxita, Paragominas, Pará, Brazil/Terra Ltda, under authorization of SEMA-PA nº 455/2009, that died of natural causes. The arterial system was filled with red latex and fixation with 10% formaldehyde solution. The aortic arch of Cerdocyon thous showed that in its origin are two vessels, brachiocephalic trunk and left subclavian artery. From brachiocephalic trunk originates the bicarotid trunk, bifurcated into left and right carotid common arteries, and right subclavian artery. The subclavian arteries originates the costocervical trunk, vertebral artery, internal thoracic artery, superficial cervical artery, to reach the axillary space, and passes to be called axillary artery on both sides. We conclude that the aortic arch of Cerdocyon thous is similar to the one in other domestic animals regarding the number of ramificastions at its origin.(AU)

Imunofenotipagem dos linfócitos positivos para indoleamina 2, 3 dioxigenase (IDO) em cultura de células de placenta bovina / Phenotyping of the indoleamine 2, 3 dioxygenase (IDO) positive lymphocytes in bovine placental cell culture

A gestação é um estado fisiológico que exige adaptações imunológicas para que transcorra normalmente. Nesse período a mãe e o feto apresentam uma relação imunológica, ou seja, a interface materno fetal. A enzima indoleamina 2,3 dioxigenase (IDO) desempenha um papel importante na tolerância materno fetal, por ser responsável pela metabolização do triptofano, impedindo por diversas vias a proliferação principalmente de linfócitos TCD8. Diversos tipos celulares estão presentes na interface materno fetal e vários deles podem expressar a IDO. Os leucócitos com perfil Th1 produzem uma citocina conhecida: o interferon γ que estimula a expressão da IDO em vários tipos celulares. Os linfócitos são divididos em subpopulações de acordo com sua função e fenótipo. Seus tipos incluem linfócitos T, linfócitos B e as células natural killer (NK). Hormônios também atuam nesse processo a progesterona que exerce função determinante sobre a resposta imunológica materna podendo alterar o prognóstico gestacional e o estrógeno essencial para a tolerância materno fetal e manutenção da prenhez. Dessa maneira este trabalho tem por objetivo principal identificar os linfócitos presentes na placenta bovina em cultivo que expressam IDO (linfócitos T, linfócitos B e células NK), frente a estimulação por progesterona, estrógeno e interferon γ nas diversas fases gestacionais utilizando a citometria de fluxo. Segundo os resultados no período de 67,5 a 77, 5 dias com a adição de interferon γ a expressão da enzima IDO aumentou discretamente nos linfócitos TCD3, TCD4, e diferente dos linfócitos T CD8 apresentaram uma elevada expressão da enzima (4,48 ± 2,12 - 8,65± 4,91)....

Pregnancy is a physiological state that requires immune adaptation in order to be successfully carried on. During this period, mother and fetus establish an immune tolerance status at the maternal fetal interface. Indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO) plays an important role in maternal-fetal tolerance by metabolizing tryptophan, impairs by several pathways, mainly T CD8 cells proliferation. Several cell types are present in the maternal fetal interface and several of them can express IDO. Leucocytes with Th1 produce a cytokine known as interferon γ that stimulates the expression of IDO in several cell types. Lymphocytes are divided into sub-populations according to their function and phenotype: T lymphocytes, B lymphocytes and natural killer cells (NK). Hormones also involved in this process where progesterone exerts decisive role on maternal immune response that may change gestational outcome and estrogen is essential for fetal maternal tolerance and maintenance of pregnancy. Therefore, the main objective of this study was to identify lymphocytes in the bovine placental cell culture that are sensitive to progesterone, estrogen and interferon γ, IDO expression in various gestational stages using flow cytometry. According to the results in the gestational period from 67.5 to 77.5 days with the addition of interferon γ expression IDO was slightly increased in TCD3 lymphocytes, CD4, and differently from the other T cells CD8 displayed an higher expression of the enzyme (4.48±2.12 to 8.65±4.91)...

Anatomia e histologia do trato urinário do macaco-prego (Sapajus apella) / Anatomy and histology of the urinary tract in the capuchin monkey (Sapajus apella

Sapajus apella é um primata do Novo Mundo de porte médio e com distribuição geográfica desde a América do Sul até a Argentina. São bons modelos para estudo e nos últimos anos vêm sendo amplamente utilizados para este fim. A destruição progressiva do habitat natural desses animais os tem levado a migrarem para outras regiões, tornando-os, assim, mais susceptíveis à caça predatória. A necessidade de preservação das espécies silvestres desperta interesse por um maior conhecimento anatômico e clínico para estes animais. O presente estudo teve como objetivo examinar e descrever os aspectos morfológicos, quanto a anatomia macroscópica e microscópica dos órgãos do sistema urinário de fêmeas da espécie Sapajus apella visando estender o conhecimento anatômico para esta espécie. Foram utilizadas quatro fêmeas, oriundas do Centro Nacional de Primatas de Ananindeua/PA. istema urinário de S. apella apresenta características similares a outros primatas tanto humanos quanto não humanos e aos animais domésticos. Os rins apresentaram aspectos macroscópicos semelhantes aos rins de humanos, mas com a mesma classificação de outros primatas não humanos e alguns animais domésticos. A bexiga assemelhou-se aos animais domésticos e aos primatas de maneira geral, humano e não humano. O mesmo ocorreu quando analisamos estes órgãos histologicamente.

Sapajus apella is a primate of the New World of midsize and with geographical distribution from South America to Argentina. Good models for the study and in recent years have been widely used for this purpose. The progressive destruction of the natural habitat of these animals has led to migrate to other regions, thus making them more susceptible to hunting predator. The need for the preservation of wild species arouses interest by a greater anatomic and clinical knowledge of these animals. The present study was aimed to examine and describe the morphological aspects, as far as the macroscopic and microscopic anatomy of the organs of the urinary system of female Sapajus apella aiming to extend the anatomical knowledge for this species. Four females were used, from the National Center of Primates in Ananindeua - PA. The urinary system of S. apella has similar characteristics to other primates both human and non-human and domestic animals. The kidneys showed macroscopic aspects similar to the kidneys of humans, but with the same classification of other non-human primates and some domestic animals. The bladder was similar to domestic animals and primates in general, human and non-human. The same occurred when we analyze these components histologically.

Topografia do cone medular da irara (Eira barbara) e sua relevância em anestesias epidurais / Topography of the conus medullari in tayra (Eira barbara) and their relevance in epidural anesthesia

Encontrada principalmente na América do Sul, a irara é um carnívoro pertencente à família Mustelidae, a qual pouco se tem informações sobre sua morfologia de forma geral. Diante disso, objetivou-se conhecer melhor parte do sistema nervoso desta espécie, mais precisamente a topografia do cone medular, a fim de subsidiar intervenções anestésicas peridurais nesta, uma vez que a clínica de animais selvagens vem crescendo a cada dia. Foram estudados três exemplares machos, adultos, provenientes da área de Mina Bauxita, Paragominas, doados ao Laboratório de Pesquisa Morfológica Animal (LaPMA), Universidade Federal Rural da Amazônia (UFRA), Belém, os quais foram radiografados e dissecados ao nível lombossacral, seguido de exposição do cone medular. Este, por sua vez, situou-se entre L4-L6 possuindo comprimento médio de 4,31cm, o que nos levou a sugerir a região sacrococcígea como ponde ideal para prática de anestesias epidurais nesta espécie.

Mainly found in South America, tayra is a carnivore belonging to the Mustelidae family, of which is little information regarding its morphology in general. The study aimed to characterize the topography of the medullar cone in order to subsidize epidural anesthetic interventions, since the clinics of wild animals is growing each day. We studied three adult male tayras from the Bauxite Mine area of Paragominas, donated to the Research Laboratory of Animal Morphology, Federal Rural University of Amazonia, Belém. They were x-rayed and dissected at the lumbosacral level to expose the medullar cone, which was found between L4-L6 with an average length of 4.31cm. This led us to suggest the sacrococcygeal region as ideal site for practice of epidural anesthesia in this species.

Origem e distribuição do plexo braquial de Saimiri sciureus / Origin and distribution of the brachial plexus of Saimiri sciureus

Os autores descreveram a origem e composição do plexo braquial de quatro Saimiri sciureus, pertencentes ao Centro Nacional de Primatas (Cenp), Ananindeua/PA, os quais foram fixados com formaldeído e dissecados. Os achados revelaram que o plexo braquial desta espécie é constituído por fibras neurais provenientes da união das raízes dorsais e ventrais das vértebras cervicais C4 a C8 e torácica T1, e organizado em quatro troncos. Cada tronco formou um nervo ou um grupo de nervos, cuja origem variou entre os animais; na maioria, foi encontrado o tronco cranial originando o nervo subclávio, o tronco médio-cranial dando origem aos nervos supraescapular, subescapular, parte do radial, e em alguns casos ao nervo axilar, nervo musculocutâneo e ao nervo mediano; o tronco médio-caudal formou parte do nervo radial, e em alguns casos os nervos axilar, nervo musculocutâneo, nervo mediano, nervo toracodorsal, nervo ulnar e nervo cutâneo medial do antebraço, sendo os dois últimos também originados no tronco caudal.

The authors described the origin and composition of the brachial plexus of four Saimiri sciureus, from the National Primate Center (Cenp), Ananindeua/PA, which were fixed with formaldehyde and dissected. Findings revealed that the brachial plexus of this species is composed by nervous fibers from the roots of cervical vertebrae C4 to C8 and thoracic vertebrae T1, and organized into four branchs. Each branch has formed a nerve or a group of nerves, the origin was varied between animals, mostly were found the cranial trunk originate the subclavian nerve; the medium-cranial originate the suprascapular, subscapular, part of radial and in some cases the axillary, musculocutaneous and median nerves; the medium-caudal trunk originate part of radial nerve and in some cases the axillary, musculocutaneous, median, thoracodorsal, ulnar and medial cutaneous of forearm nerves, the last two nerves also originate from the caudal trunk.

Histologia e ultraestrutura do rim e rim cefálico do pacu / Histology and ultrastructure of kidney and cephalic kidney in Pacu

O pacu, Piaractus mesopotamicus, é um teleósteo da Família Characidae, intensivamente cultivado no Brasil devido sua rusticidade, crescimento rápido e fácil adaptação. O conhecimento morfológico dos sistemas corpóreos, incluído órgãos linfóide, se faz necessário, para uma melhor produção no cultivo de peixes, fornecendo subsídios na manutenção dos estoques. O objetivo deste estudo foi descrever morfologicamente o rim e rim cefálico de Piaractus mesopotamicus, analisando os perfis celulares de cada órgão com o uso de microscopia de luz e microscopia eletrônica de transmissão. O resultado da análise macroscópica mostrou que a localização do rim e rim cefálico são as mesmas encontradas na maioria dos teleósteos. O rim apresentou uma forma em "H", onde a região média se expandia sobre a bexiga natatória. O rim cefálico se apresentou como uma dilatação na região cranial do rim, mostrando-se bem visível. Na microscopia eletrônica de transmissão também foram observadas similaridades ultraestruturais com outros teleósteos. Observando nossos resultados concluímos que histologicamente e ultraestruturalmente, os órgãos linfóides rim e rim cefálico de Piaractus mesopotamicus são similares aos de outros teleósteos.

The Pacu, Piaractus mesopotamicus, is a teleostei of the Characidae family, intensively cultivated in Brazil due to its rusticity, fast growth and easy adaptation. Morphological knowledge of the body systems including the lymphoid organs is necessary to improve fish production and supply subsidies for the maintenance of stocks. This study aimed to describe morphologically kidney and head kidney of Piaractus mesopotamicus, analyzing the cellular profile of each organ with the use of light microscopy and electronic transmission microscopy. The result of the macroscopic analysis showed that the localization of the kidney and head kidney is the same as found in the majority of the teleostei. The kidney presented a form in "H", where the medium region is expanded on the natatorium bladder. The head kidney presented a dilatation in the cranial region of the kidney. In the transmission electronic microscopy we found ultrastructural similarities with other teleostei fish. It can be concluded that the lymphoid organs (kidney and head kidney) of Piaractus mesopotamicus are histologically and ultra-structurally similar to the other teleostei.

Saimiri sciureus' hard palate morphology / Morfologia do palato duro de Saimiri sciureus

Primate order includes around 180 species. Morphological aspects of New World non-human primates (NHP) have been extensively investigated since last century. General commonsense describes oral cavity adaptations according to diet and feeding, dentition, tongue projection and head shape. Morphological appearance and dimension of the hard palate have been outstanding as interest in many species including man. Six young Saimiri sciureus hard palate were investigated. We measured the hard palate distance (HL), intercanine distance (ICD), intermolar distance (IMD), and interpremolar distance (IPD). Complete and incomplete palatine crests were quantified. We believe that better understanding of the mouth roof morphology will contribute to improve the management of captive animal's diet in order to re-introduce the animals in its habitat.

A ordem dos primatas inclui ao redor de 180 espécies, os aspectos morfológicos dos primatas não humanos do Novo Mundo tem sido investigados extensivamente desde o último século. O senso comum descreve adaptações na cavidade oral de acordo com a dieta e alimentação, dentição, projeção da língua e formato da cabeça. A aparência morfológica e a dimensão do palato duro demonstram interesses para muitas espécies incluindo o homem. Foram investigados seis palatos de Saimiri sciureus jovens os quais foram mensurados: o comprimento do palato duro (HL); a distância intercaninos (ICD); a distância intermolares (IMD) e, a distância interpremolar (IPD). As cristas palatinas completas e incompletas foram quantificadas. Nós acreditamos que para o melhor entendimento da morfologia da boca pode contribuir para melhorar a dieta dos animais mantidos em cativeiro a fim de introduzir estes animais em seu habitat.

Macroscopic aspects of Saimiri sciureus dura mater / Aspectos macroscópicos da dura mater de Saimiri sciureus

Saimiri sciureus is a small New World primate (NHP) commonly called macaco-de-cheiro that inhabits the tropical forests of the Amazon basin. Anatomical features are not well studied in most primates, and the encephalic morphology and related structures are still quite unknown. Comparative anatomy of the meninges in South American primates is still scarce. Dura mater, arachnoid and pia mater are a group of stratified layers that surrounds and promotes protection to the medulla spinalis. This study aimed to shed light on the anatomy of dura mater in Samiri sciureus in order to contribute to the neuroscience in primates. We investigated three young females and two males of S. sciureus. Specimens were fixed through perfusion with a 10 percent formaldehyde aqueous solution. In S. sciureus encephalus few gyrus and circunvolutions, and a very delicate system consisting of eight sinus venosus was found between the dura mater layers. Based on our findings, we can conclude that the Saimiri sciureus dura mater is quite similar to other mammals, however we detected a new sinus venosus formation at the level of parietal bone, named sinus parietalis, what appears to be its first description.

Saimiri sciureus, com nome comum de macaco-de-cheiro, é um pequeno primata do Novo Mundo (PNM) que habita as florestas tropicais da Bacia Amazônica. Os detalhes anatômicos de primatas são pouco conhecidos e a anatomia comparada de animais selvagens da América do Sul é escassa, mais especificamente, sobre as meninges de PNM. Meninges pertencem a um sistema de membrana responsável por envolver e proteger o Sistema Nervoso Central; consiste em três membranas: dura mater, aracnoide e pia mater. Este estudo objetivou a elucidação do comportamento anatômico da dura mater de S. sciureus com o intuito de contribuir para a área de neurociências em primatas. Foram investigados três fêmeas e dois machos jovnes de S. sciureus. Os espécimes de meninges foram fixados por perfusão usando solução aquosa 10 por cento de formaldeído. O encéfalo de S. sciureus demonstrou um número baixo de giros e circunvoluções, e um sistema delicado de oito seios venosos foi verificado entre as camadas da dura mater. Baseados em nossos achados podemos concluir que a dura mater de S. sciureus é similar aos de outros mamíferos, no entanto, apresenta a formação de um novo seio venoso em nível ao osso parietal, sendo denominado de seio parietal. Isto parece ser a primeira descrição deste seio.

Caring about medullary anesthesia in Saimiri sciureus: the conus medullaris topography

Saimiri sciureus is a New World non-human primate (NHP) that inhabits Brazilian rain forests. Surgical interventions in wild NHPs can be considered common both for experimental studies procedures and corrective procedures for endangered species. Among various anesthetic procedures, the epidural anesthesia or blockades, depending on the surgical procedure, might be considered elective for wild monkeys, mostly based on its safeness, efficiency and non-time consuming characteristics. However its safeness would be limiting because of the spinal cord arrangement. Notwithstanding the available former studies on New World NHP anatomy, the description of the medullar cone of Saimiri sciureus is still scarce. Therefore, we believe that the better understanding the medullar cone of Saimiri sciureus would contribute to improve the applicability of epidural procedures in the species. Vertebrae architecture of Saimiri sciureus was composed by 9 lumbar, 3 sacral and 18 coccygeal vertebrae, and the medullar cone measured about 3.3 cm. We can conclude that the conus medullaris in Saimiri sciureus is situated more caudally in comparison to other species.

Saimiri sciureus é um primata não humano do novo mundo (NHP) que habita as florestas úmidas brasileiras. Intervenções cirúrgicas em NHP selvagens podem ser consideradas comuns em estudos experimentais ou procedimentos corretivos para espécies em perigo. Entre os vários procedimentos anestésicos, a anestesia ou bloqueio epidural depende do procedimento cirúrgico a ser realizado, podendo ser considerada eletiva para macacos selvagens baseada na segurança, eficiência e pouco tempo consumido, entretanto sua segurança pode estar limitada devido ao arranjo da medula espinhal. Apesar de existirem estudos anatômicos disponíveis de NHP a descrição do cone medular do Saimiri sciureus permanece escassa. Portanto, nós acreditamos que o melhor entendimento a respeito do cone medular do Saimiri sciureus pode contribuir para melhorar a aplicabilidade de procedimentos epidurais nesta espécie. A arquitetura vertebral do Saimiri sciureus é composta por 9 vértebras lombares, 3 sacrais e 18 coccígeas e o cone medular apresentou tamanho médio de 3,3 cm. Podemos concluir que o cone medular Saimiri sciureus está situado mais caudalmente em comparação com outras espécies.

Topografia do cone medular da preguiça / Topography of the conus medullaris in sloths

A anestesia caudal foi proposta pela primeira vez em 1926 e diversas técnicas foram desenvolvidas para anestesiar os nervos espinhais lombares e sacrais. Os métodos para anestesia epidural exigem conhecimento da anatomia da região envolvida. Desta forma, objetivou-se determinar a topografia do cone medular da preguiça (Bradipus variegatus), para fornecer recursos aos profissionais da área clínica para que, desta forma, seja possível a realização de anestesia epidural nesta espécie silvestre de nossa fauna. Foram dissecados quatro exemplares adultos de preguiça, dois machos e duas fêmeas que foram a óbito por causas naturais e obtidos junto ao Parque Zoobotânico do Museu Paraense Emilio Goeldi, Belém/Pará. Após a dissecação observou-se que o cone medular encontra-se entre as vértebras L3 e S1 com comprimento médio de 2,7cm, e a intumescência lombar apresentou comprimento médio de 1,0cm, estando localizada entre L1 e L3 nos quatro animais estudados. Desta forma, conclui-se que o melhor local para a realização de anestesia epidural na preguiça está entre as vértebras L1 e L3.

Caudal anaesthesia was initially proposed in 1926, since when techniques have been evolved for lumbar and sacral anaesthesia. Essentially, epidural anaesthesia demands regional anatomy knowledge. We aimed to determine medullar conus topography in sloth (Bradipus variegatus), in order to supply information for epidural anaesthesia in this species. Four adult sloths were investigated, two males and two females, that died from natural causes and were donated by the Zoobotanic Park of Emilio Goeldi Museum, Belém/Pará. It was observed that the medullar conus lies between L3 and S1vertebrae, average length measuring 2.7cm, and that the lumbar swelling is located between L1 and L3 with an average length of 1.0cm. We concluded that the most appropriate site to perform epidural anesthesia in sloths is from L1 to L3 vertebral spaces.

Ultrastructural characterization of bovine umbilical cord blood cells / Caracterização ultra-estrutural das células sanguíneas do cordão umbilical bovino

The umbilical cord blood (UCB) is an important source of pluripotent stem cells, which motivated researches on ontogeny and transplantation. The morphological characterization of umbilical cord cells is the first step to establish subsequent experiments on these areas. Although some information on humans can be found, no data on UCB is available for bovines. Therefore, this work is the first attempt to conduct an ultrastructural characterization of bovine umbilical cord blood. Blood was collected from the umbilical cord of twenty fetuses by punction of the umbilical vein. Samples were processed for whole leucocytes observation by centrifugation and the buffy coat was collected. Cells were washed and pelleted and prepared according to the standard protocol of the transmission electron microscopy. The presence of cells with morphologic characteristics compatible with the precursors from the erythrocytic, neutrophilic, eosinophilic, basophilic, and lymphocytic lineages was observed. Atypical cells with peculiar morphological features, strongly similar to apoptotic cells, were seen. Bovine neutrophils with three types of cytoplasmic granules were also found in the blood. The ultrastructural characteristics of observed bovine UCB cells where similar to those found in other species, suggesting that bovines could possibly constitute an experimental model for approaches on UCB cells research.

O sangue de cordão umbilical (SCU) é uma importante fonte de células progenitoras pluripotentes, que motiva pesquisas em ontogenia e transplantes. A caracterização morfológica das células de cordão umbilical é o primeiro passo para se estabelecer experimentos subsequentes nessas áreas. Embora algumas informações sobre SCU em humanos possam ser encontradas, não existe nenhuma informação disponível sobre elas em bovinos. Portanto, este trabalho é a primeira tentativa de se conduzir uma caracterização ultra-estrutural do sangue de cordão umbilical bovino. O sangue foi coletado do cordão umbilical de 20 fetos por punção da veia umbilical. As amostras foram processadas para observação dos leucócitos totais por centrifugação pela coleta do botão leucocitário. As células foram lavadas, peletizadas e preparadas de acordo com protocolo padrão para microscopia eletrônica de transmissão. A presença de células com características morfológicas compatíveis com precursores das linhagens eritrocítica, neutrofílica, eosinofílica, basofílica e linfocítica foram observadas. Células atípicas com características morfológicas peculiares muito semelhantes a células em apoptose foram observadas. No sangue do cordão umbilical também foi encontrado neutrófilos bovinos apresentando três tipos de grânulos citoplasmáticos. As características ultraestruturais do SCU bovino foram semelhantes às encontradas em outras espécies, sugerindo que esta espécie possa servir como modelo experimental para abordagens em pesquisa sobre sangue de cordão umbilical.

Producción y purificación de anticuerpos (IgY) a partir de huevos de gallinas inmunizadas con epimastigotas de trypanosoma cruzi / Production and purification of IgY antibodies from eggs laid by hens inmunized with trypanosoma cruzi epimastigotes

No obstante las ventajas de producir anticuerpos en gallinas, no se ha reportado inducción y purificación de anticuerpos contra estadios de Trypanosoma cruzi en el modelo aviario. La inducción de anticuerpos anti-estadios de T. cruzi en gallina puede garantizar la producción de reactivos útiles en diagnóstico y terapéutica de la enfermedad de Chagas. Aquí reportamos la obtención y rápido aislamiento de IGY procedente de yema de huevos de gallinas inmunizadas contra epimastigotas de T. cruzi a los 7, 22 y 61 días post-inmunización. Se compararon tres estrategias de purificación de IgY: el método de la dilución acuosa, el método del polietilén glicol (PEG) y el método del cloroformo-PEG, respecto a un estuche comercial. El método del cloroformo-PEG dio un rendimiento de 6,4 mg/mL de proteínas de yema de huevo de 61 días con una sensibilidad tal que 7 ng de IgY detectaron 1 µg de antígeno (ELISA). Por Western blot, 5 µg/mL de IgY revelaron 11 antígenos diferentes en 8 µg de proteína total de epimastigotas. El análisis por SDS-PAGE demostró que las IgY extraídas contienen dos bandas proteícas dominantes de 70/57 y 37/35 kDa y dos tenues de 81 y 41 kDa, las cuales pueden ser eliminadas por re-precipitación con PEG. Para la extracción de IgY el método del cloroformo-polietilén glicol dio la mejor combinación por facilidad de ejecución y bajo costo. Si bien rindió 50 por ciento menos que el estuche comercial bajo las mismas condiciones, la sensibilidad de los anticuerpos fue 4 veces mayor. Estos resultados evidencian la factibilidad del modelo aviario para producir anticuerpos contra estadios de T. cruzi y muestran la experticia para purificarlos usando una tecnología local de bajo costo

Morphological comparison of axenic amastigogenesis of trypomastigotes and metacyclic forms of Trypanosoma cruzi

Amastigogenesis occurs first when metacyclic trypomastigotes from triatomine urine differentiate into amastigotes inside mammalian host cells and a secondary process when tissue-derived trypomastigotes invade new cells and differentiate newly to amastigotes. Using scanning electron microscopy, we compared the morphological patterns manifested by trypomastigotes and metacyclic forms of Trypanosoma cruzi during their axenic-transformation to amastigotes in acidic medium at 37ºC. We show here that in culture MEMTAU medium, secondary and primary axenic amastigogenesis display different morphologies. As already described, we also observed a high differentiation rate of trypomastigotes into amastigotes. Conversely, the transformation rate of in vitro-induced-metacyclic trypomastigotes to amastigotes was significantly slower and displayed distinct patterns of transformation that seem environment-dependent. Morphological comparisons of extracelullar and intracellular amastigotes showed marked similarities, albeit some differences were also detected. SDS-PAGE analyses of protein and glycoprotein from primary and axenic extracelullar amastigotes showed similarities in glycopeptide profiles, but variations between their proteins demonstrated differences in their respective macromolecular constitutions. The data indicate that primary and axenic secondary amastigogenesis of T. cruzi may be the result of different developmental processes and suggest that the respective intracellular mechanisms driving amastigogenesis may not be the same

Production of amastigotes from metacyclic trypomastigotes of Trypanosoma cruzi

Attempts to recreate all the developmental stages of Trypanosoma cruzi in vitro have thus far been met with partial success. It is possible, for instance, to produce trypomastigotes in tissue culture and to obtain metacyclic trypomastigotes in axenic conditions. Even though T. cruzi amastigotes are known to differentiate from trypomastigotes and metacyclic trypomastigotes, it has only been possible to generate amastigotes in vitro from the tissue-culture-derived trypomastigotes. The factors and culture conditions required to trigger the transformation of metacyclic trypomastigotes into amastigotes are as yet undetermined. We show here that pre-incubation of metacyclic trypomastigotes in culture (MEMTAU) medium at 37ºC for 48 h is sufficient to commit the parasites to the transformation process. After 72 h of incubation in fresh MEMTAU medium, 90 percent of the metacyclic parasites differentiate into forms that are morphologically indistinguishable from normal amastigotes. SDS-PAGE, Western blot and PAABS analyses indicate that the transformation of axenic metacyclic trypomastigotes to amastigotes is associated with protein, glycoprotein and antigenic modifications. These data suggest that (a) T. cruzi amastigotes can be obtained axenically in large amounts from metacyclic trypomastigotes, and (b) the amastigotes thus obtained are morphological, biological and antigenically similar to intracellular amastigotes. Consequently, this experimental system may facilitate a direct, in vitro assessment of the mechanisms that enable T. cruzi metacyclic trypomastigotes to transform into amastigotes in the cells of mammalian hosts

Early and late molecular and morphologic changes that occur during the in vitro transformation of Trpanosoma cruzi metacyclic trypomastigotes to amastigotes

The amastigogenesis primary of T. cruzi occurs naturally when metacyclic trypomastigotes transform into amastigotes within the cells of the mammalian host. The in vitro study of the macromolecular changes that occur over several days during the transformation process should provide significant indications of how the parasite adapts to the mammalian host environment. We show here that metacyclic trypomastigotes pre-incubated at 37 degrees C in a protein-rich medium reach a high degree of transformation to amastigotes when re-incubated in the fresh medium. Giemsa-stained smears show that during the pre-incubation phase, the metacyclic trypomastigotes undergo lengthening at the posterior end and a thinning out of the entire body. SDS-PAGE analysis of polypeptides and glycopeptides or Western blot with stage-specific antisera analyses indicate that the in vitro primary amastigogenesis is associated with abrupt changes in protein, glycoprotein, and stage-specific antigens that occur simultaneously during the first 24 hours of pre-incubation. Since the differentiating system consists of a rich media at 37 degrees C, temperature and medium constitution must trigger a macromolecular differentiation to amastigotes that precedes the morphological transformation by several days. This transformation is associated with the rearrangement of stage-specific antigens and takes place when the culture medium is changed.

Separación de polipéptidos antigénicos de trypanosoma cruzi usando soluciones de pH diferentes / Separation of antigenic polypeptides of tripanosoma cruzi using defferential solubility in different pHs

Fracciones antigénicas útiles para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas son obtenidas utilizando metodologías costosas, por eso es necesario desarrollar tecnologías que reduzcan los costos de producción. Previamente mostramos que los polipéptidos de trypanosoma cruzi se solubilizan diferencialmente en soluciones con valores de pH diferentes. El Propósito en este estudio fue obtener fracciones enriquecidas en polipéptidos de T. cruzi antigénicamente funcionales en base a su solubilidad diferencial. Los perfiles polipeptídicos de los epimastigotas fueron identicados por electroforesis en geles de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE), coloreados por el método de la plata metálica. La antigenicidad de los polipéptidos se estudió mediante Western Bot usando un suero específico anti-epimastigotas. Se encontró que: a) la solubilidad de los polipéptidos no fue afectada por cambios en la fuerza iónica entre 0 y 250 mM NaCl; b) todos los polipéptidos se precipitaron a pH 4,0 mientras que el incremento secuencial del pH de la solución de resuspensión produjo un enriquecimiento diferencial de polipéptidos de mayor peso molecular; c) las fracciones enriquecidas, procedentes de soluciones con valores pH menores que 7,0, mostraron una fuerte actividad proteolítica la cual fue inhibida a pH alcalino y; d) los polipéptidos conservaron su antigenicidad. Estos resultados muestran una metodología sencilla y relativamente económica para producir fracciones antigénicas. Están en progreso experimentos para reducir la actividad proteolítica y obtener polipéptidos útiles para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas